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考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質含量的原理是什么
在酸性條件下,考馬斯亮蘭G-250染料與蛋白質疏水區(qū)結合,導致da吸收峰由465 nm 變?yōu)?95 nm,工業(yè)級亮藍批發(fā),同時顏色也由棕色變?yōu)樗{色,該藍色化合物顏色的深淺與蛋白質濃度的高低成正比關系。將蛋白質樣品或稀釋的BSA 與Bradford試劑混合,測量在595 nm處的吸收值,在建立由一系列稀釋的BSA建立的標準曲線的情況下,蛋白質的濃度可以根據標準曲線而確定。
考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色,da光吸收在488nm;當它與蛋白質結合后變?yōu)榍嗌?,蛋白質-色素結合物在595nm波長下有da光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比,因此可用于蛋白質的定量測定。蛋白質與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內達到平衡,工業(yè)級亮藍廠家,完成反應十分迅速;其結合物在室溫下1h內保持穩(wěn)定。
該法是1976年Bradford建立,試劑配制簡單,操作簡便快捷,反應非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質含量,測定蛋白質濃度范圍為0~1 000μg/mL,xaio可測2.5μg/mL蛋白質,是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。
考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由于與蛋白質的結合反應十分迅速,常用來作為蛋白質含量的測定??捡R斯亮藍R250與蛋白質反應雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
【復合著色劑的使用】根據需要,可將本品與本公司生產的其他色澤的著色劑按適當比例配制各種不同的顏色。
在使用本公司配置號的復合食品著色劑時,應確保按本品標簽上的配料提示所涉的各單色品種都在GB2760使用范圍內,工業(yè)級亮藍生產廠家,按所列單色著色劑的品種等比例的方法確定使用量(本使用說明列舉的使用范圍和使用量是指各單色品種均能使用的范圍和使用量)
【使用方法】
將標準稱量的本品置于容器中,逐漸加入適量溫水,并不斷攪拌使之完全溶解,所得溶液即可用于著色。
使用過程中應注意盡量避免或減少酸、堿、氧化劑、還原劑、金屬離子、微生物等物質的不良影響,并注意避免受高溫與暴曬,以防腿色或變色。
【運輸及貯存】
運輸時須防潮、防曬、應貯存于干燥陰涼處、貯運過程中不得與有毒、有害物質混裝、混運、混放。
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